ИСТИНА

). Конкретной фундаментальной задачей проекта является выяснение вопроса, являются ли эти два способа трансляционной активации РНК ХВК, типового представителя рода Potexvirus, общими для других членов этой таксономической группы. В рамках заявляемого проекта планируется решить следующие конкретные задачи: 1. Изучение трансляционных свойств инкапсидированной РНК потексвирусов (вируса мозаики нарцисса -ВМН, вируса мозаики альтернантеры -ВМАлт, вируса аукубы мозаики картофеля - ВАМК, вирус мозаики перца-ВМПер) in vitro и возможности трансляционной активации РНК потексвирусов путем фосфорилирования белка оболочки вирусов в составе вириона или вирусного рибонуклеопротеида. 2. Будут получены рекомбинантные транспортные белки различных потексвирусов и проведено сравнительное изучение роли ТБ1 в трансляционной активации инкапсидированной РНК. 3. Важнейшей конкретной фундаментальной задачей проекта является разработка подходов, которые позволят перейти к исследованию активации трансляции РНК потексвирусов в составе транспортной формы в растительной клетке (in vivo). На основе кДНК копии геномной РНК ХВК будут созданы вирусные векторы, которые дадут возможность независимо регистрировать переход транспортной формы в соседнюю клетку и трансляционную активацию, содержащейся в ее составе РНК.

Проведены сравнительные исследования способности рекомбинантных ТБ1 потексвирусов к трансляционной активации РНК в составе комплексов с гетерологичными вирионами. Показано, что ТБ1 белки потексвирусов помимо того, что способны трансляционно активировать гомологичную инкапсидированную РНК, также в ряде случаев активируют РНК в составе вирионов других вирусов, относящихся к данной таксономической группе. Созданы вирусные векторы на основе кДНК копии геномной РНК ХВК, которые позволят независимо детектировать два события: 1) переход транспортной формы вируса в соседнюю незараженную клетку и 2) последующую трансляцию содержащейся в ее составе РНК. Таким образом, разработан подход для изучения трансляционной активации РНК ХВК in vivo. Получены вирусоподобные частицы (ВПЧ) из БО ВМАльт в отсутствие РНК. Показана возможность образования комплексов ВПЧ с ТБ1 потексвирусов. Методом атомно-силовой микроскопии продемонстрирована дестабилизация белковой спирали ВПЧ в составе комплексов (ВПЧ-ТБ1) Методами атомно-силовой и просвечивающей электронной микроскопии изучена структура нуклопротеидов - ДНП, образованных ДНК со случайной нуклеотидной последовательностью и БО ХВК, и «смешанные» вРНП, состоящих из гетерологичных РНК и БО потексвирусов: ХВК и ВМАльт. Изучены трансляционные свойства гетерологичных РНК в составе «смешанных» вРНП. Показана возможность контролируемой разборки таких частиц при взаимодействии с ТБ1. Полученные результаты служат новым доказательством главной роли белок-бековых взаимодействий при трансляционной активации инкапсидированной РНК потексвирусов. Сконструирован вирусный вектор на основе геномной РНК нового штамма ВМАльт (ВМАльт-MU), имеющей новую архитектуру и способный эффективно продуцировать целевые белки в растениях.