Аннотация:Алкалоиды группы цефалотаксина (ЦФТ), такие как гомохаррингтонин (ГХТ) и харрингтонин (ХТ), выделяемые из коры растения Cephalotaxus harringtonia, используются в медицинской практике как противоопухолевые препараты. Данные соединения ингибируют биосинтез белка в эукариотических клетках, связываясь с 60S субъединицей рибосомы. Однако на сегодняшний день молекулярный механизм действия этих алкалоидов изучен недостаточно. Недавние исследования показали, что остановка трансляции при действии ХТ происходит только в том случае, когда в P-сайте рибосомы находятся кодоны, соответствующие аминокислотам лизин, тирозин и аргинин. Эти данные непосредственно указывают на роль растущей полипептидной цепи в ингибировании пептидилтрансферазной реакции.
С целью более детального изучения процесса остановки трансляции под действием алкалоидов группы ЦФТ, в настоящей работе получены производные цефалотаксина, содержащие аминокислотные и пептидные остатки. Выбор соединений был основан как на данных по ингибированию трансляции ХТ, так и на результатах молекулярного докинга, который проводился с использованием рентгеноструктурных данных комплексов рибосомы с ГХТ. По результатам молекулярного моделирования были выбраны соединения, которые имеют наибольшую расчетную энергию взаимодействия с рибосомой, связываясь таким образом, что их пептидный заместитель направлен в сторону рибосомного туннеля.
Полученные производные цефалотаксина изучены на их способность взаимодействовать с рибосомами и ингибировать биосинтез белка как у эукариот, так и у прокариот. Связывание данных соединений с прокариотическими рибосомами изучено по вытеснению ими флуоресцентно-меченного антибиотика из комплексов с рибосомами E.coli. Действие полученных ингибиторов на трансляцию у эукариот проверяли с помощью метода ту принтинга (in vitro), а также методом «краткосрочной мРНК-трансфекции», позволяющим оценить влияние ингибиторов белкового синтеза на трансляцию репортерных мРНК в культивируемых клетках млекопитающих.