Аннотация:Губки (Porifera) – многоклеточные животные с фильтрационным питанием и дыханием. Клетки в их теле находятся в состоянии постоянного движения и трансдифференцировки. Одним из проявлений высокой лабильности клеток губок является их способность к реагрегации после диссоциации тканей животного, сопровождающейся большим количеством дедифференцировок и/или трансдифференцировок клеток и приводящей к полному восстановлению исходной организации животного. Убиквитин-протеасомная система в живых клетках играет ключевую роль в обеспечении важных адаптивных приспособленй, регулируя гомеостаз клеточного протеома. В процессе реагрегации клеток губок работа убиквитин-протеасомной системы должна быть ярко выражена.
Цель исследования – охарактеризовать пул протеасом в тканях, суспензии клеток и многоклеточных агрегатах Halichondria panicea на разных этапах реагрегации. Сбор образцов губок и эксперименты по реагрегации проводились на базе Беломорской биостанции им. Н.А. Перцова. В осветлённых гомогенатах образцов определяли химотрипсинподобную (ХПА) и каспазоподобную (КПА) активности протеасом по уровню гидролиза коммерческих флуорогенных олигопептидов Suc-LLVY-AMC и Z-LLG-АМС, соответственно. Содержание каталитических β1 и β5 и конститутивной 1,2,3,5,6,7 субъединиц протеасом, а также их регулятора РА700 оценивали с помощью Вестерн-блоттинга.
В ходе работы был впервые охарактеризован пул протеасом у наиболее примитивной группы Metazoa – губок, на примере H.panicea. ХПА холодоводной H.panicea демонстрирует высокую температурную лабильность и реализуется даже при температурах в три раза превышающих физиологический оптимум для животного. Значения ХПА и КПА в суспензии клеток губки H.panicea ниже по сравнению с таковыми в интактных тканях. В тканях содержание α-субъединиц и каталитической β5 субъединицы протеасом выше, чем в суспензии клеток. В суспензии клеток присутствует активатор РА700. В процессе реагрегации наблюдались изменения ХПА, сопровождавшиеся изменением в содержании β5, но не α-субъединиц протеасом. Снижение ХПА протеасом наблюдалось в агрегатах возрастом 3-5 суток, у которых происходят значительные гистологические перестройки.
Данная работа впервые позволила выявить особенности функционирования убиквитин-протеасомной системы у низших Metazoa, на примере холодоводной H.panicea.