Место издания:Издательствово СПбГУ Санкт-Петербург
Первая страница:377
Последняя страница:378
Аннотация:Отщепление N-концевого остатка метионина увеличивает биологическую активность
антагониста рецептора интерлейкина-36 человека (IL-36Ra)
Введение: Антагонист рецептора интерлейкина-36 (IL-36Ra) функционирует в покровных тканях
как противовоспалительный цитокин, подавляющий активность интерлейкина-36γ (IL-36γ).
Физиологическая роль IL-36Ra и IL-36γ, по всей видимости, связана с регуляцией процессов
воспаления в коже. Было показано, что мутации в гене рецепторного антагониста интерлейкина
36 (ген IL36RN) приводят к развитию тяжелого заболевания – генерализованного пустулярного
псориаза. Неоднократно высказывались предположения о возможности использования
рекомбинантного IL-36Ra человека в терапии псориаза. Разработка кандидатного препарата
требует поиска наиболее биологически активной и стабильной формы белка. Целью данной
работы было экспериментально проверить ранее высказанную гипотезу о том, что
протеолитическое отщепление N-концевого остатка метионина способно увеличивать
биологическую активность IL-36Ra.
Результаты: Рекомбинантный IL-36Ra человека был получен нами в E.coli BL21 DE3 в растворимой
форме. Методика очистки включала в себя ионообменную хроматографию на сорбенте Q-XL (GE
Life Sciences), осаждение примесных белков 1М сульфатом аммония и гидрофобную
хроматографию на сорбенте Butyl-TSK (Tosoh). Белок был очищен до 98% чистоты по данным ОФ-
ВЭЖХ анализа. Часть полученного препарата была обработана рекомбинантной
метионинаминопептидазой человека (MetAP) (R&DTechnologies). Сравнение биологической
активности обработанного MetAP и необработанного образцов выявило двукратное увеличение
биологической активности обработанного MetAP образца по сравнению с необработанным. Было
показано, что 50% конкурентное ингибирование активности IL-36γ рецепторным антагонистом
интерлейкина-36 достигается уже при эквимолярном соотношении между ними.
Заключение: В нашем исследовании мы показали, что посттрансляционное отщепление
метионина в 2 раза увеличивает биологическую активность IL-36Ra. Доказательство этого факта
является важным шагом на пути к созданию активной субстанции на основе IL-36Ra для
фармакологического применения.