|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
CAS13A: ПОЛУЧЕНИЕ И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИРУСНОЙ РНКстатья
- Авторы: Савинова А.С., Коптев Е.Ю., Усачев Е.В., Ткачук А.П., Гущин В.А.
- Журнал: Вестник Российского государственного медицинского университета
- Номер: 2
- Год издания: 2018
- Издательство: РНИМУ им. Н. И. Пирогова
- Местоположение издательства: Москва
- DOI: 10.24075/vrgmu.2018.021
- Аннотация: Использование CRISPR-Cas систем для редактирования геномов организмов в последнее время стало одним из магистральных научных направлений. Между тем белки системы CAS можно применять для разработки методов молекулярной диагностики. Традиционные подходы к идентификации микроорганизмов имеют ряд недостатков: они времязатратны (культуральные методы диагностики), недостаточно чувствительны (иммунологические методы), имеют высокую себестоимость и методически сложны (ПЦР, секвенирование). Целью работы было получение функционально активного препарата белка Cas13а и изучение его поведения в различных условиях, в том числе при изменении концентрации мишени, для дальнейшего использования в диагностических целях. Была создана генетическая экспрессионная конструкция, имеющая на 5'-конце T7-промотер и ген сas13a бактерии Leptotrichia wadei. Получены препараты функционально активной программируемой РНКазы белка Cas13a, направляющей РНК, а также РНК вируса гриппа Б (РНК-мишень). Функциональную активность РНКазы белка Cas13a определяли по появлению флуоресцентного сигнала в реакционной смеси, содержащей направляющую РНК, РНК-мишень, молекулярный РНК-маячок. Показано, что полученный препарат белка Cas13a способен специфически выявлять мишень на примере фрагментов РНК вируса гриппа Б и не обладает неспецифическими видами РНКазной активности. Данное исследование может стать основой для создания нового быстрого специфичного и чувствительного метода идентификации микроорганизмов.
- Добавил в систему: Савинова Алина Сергеевна