|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
КЛОНАЛЬНЫЙ СОСТАВ МУЛЬТИПОТЕНТНЫХ МЕЗЕНХИМНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА: ПРИМЕНЕНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ШТРИХ-КОДОВ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯстатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАКСтатья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 11 марта 2020 г.
- Авторы: Бигильдеев А.Е., Пилунов А.М., Сац Н.В., Сурин В.Л., Шипунова И.Н., Петинати Н.А., Логачева М.Д., Федотова А.В., Касьянов А.С., Артюхов А.С., Дашинимаев Э.Б., Дризе Н.И.
- Журнал: Биохимия
- Том: 84
- Номер: 3
- Год издания: 2019
- Издательство: ФГБУ "Издательство "Наука"
- Местоположение издательства: Москва
- Первая страница: 365
- Последняя страница: 379
- DOI: 10.1134/S0320972519030072
- Аннотация: В работе изучали клональный состав мультипотентных мезенхимных стромальных клеток (ММСК) человека, маркированных с помощью лентивирусных векторов, несущих генетические штрих-коды. ММСК были инфицированы клонированной библиотекой самоинактивирующихся лентивирусных векторов, несущих 667 неповторяющихся штрих-кодов. При каждом пассировании культуры 120 клеток клонировали в 96-луночных планшетах по одной клетке на лунку. Определяли эффективность клонирования и маркирования клоногенных клеток. Из клеточных колоний-клонов выделяли ДНК и идентифицировали штрих-коды с помощью секвенирования по методу Сэнгера. Из общей популяции ММСК каждого пассажа также выделяли ДНК и определяли разнообразие, а также представленность штрих-кодов с помощью метода глубокого секвенирования на платформе Illumina. Было показано, что доля маркированных лентивирусными векторами ММСК стабильна в пассажах. Процедура маркирования при высоких значениях множественности заражения может приводить к снижению пролиферации ММСК. Анализ штрих-кодов в отдельных клеточных клонах подтвердил поликлональность популяции ММСК. При пассировании культуры ее клональный состав значительно менялся вследствие истощения пролиферативного потенциала большинства клеток. Большие клоны были обнаружены на первом пассаже ММСК, далее в популяции выявлялось множество небольших клонов с ограниченным пролиферативным потенциалом. Результаты глубокого секвенирования подтвердили данные об изменении клонального состава ММСК. В поликлональной популяции ММСК содержится лишь небольшое количество клеток с высоким пролиферативным потенциалом, среди которых могут быть и стволовые. ММСК с высоким пролиферативным потенциалом чаще выявляются на самых ранних пассажах. В связи с этим для использования ММСК в подходах регенеративной медицины, опирающихся на пролиферацию клеток, рекомендуется применять ММСК ранних пассажей.
- Добавил в систему: Пилунов Артем Михайлович