|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
СТАБИЛЬНАЯ ЭКСПРЕССИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ФАКТОРА СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ VIII В КЛЕТКАХ CHO С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АМПЛИФИКАЦИИ ТРАНСГЕНА, ИНИЦИИРОВАННОЙ МЕТОТРЕКСАТОМстатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
- Авторы: Орлова Н.А., Ковнир С.В., Воробьев И.И., Юрьев А.С., Габибов А.Г., Воробьев А.И.
- Журнал: Acta Naturae (русскоязычная версия)
- Том: 4
- Номер: 1
- Год издания: 2012
- Издательство: Парк-медиа
- Местоположение издательства: М.
- Первая страница: 96
- Последняя страница: 104
- Аннотация: Больные гемофилией А - наследственным нарушением свертывания крови - нуждаются в регулярном применении препаратов фактора свертывания крови VIII. Рекомбинантный фактор VIII, продуцируемый в клетках линий СНО или ВНК, эквивалентен природному фактору VIII плазмы крови и широко используется в современной клинической практике. Получение биосимилярного рекомбинантного фактора VIII требует создания высокопродуктивной клональной клеточной линии и получения моноклональных антител, пригодных для аффинной очистки продукта. Изучена возможность амплификации трансгенов полноразмерного и делеционного вариантов фактора VIII, встроенных под контролем цитомегаловирусного промотора в геном трансфицированных клеток, под действием метотрексата. Установлено, что уровень секреции делеционного варианта фактора VIII в 6.5 раза выше, чем природного FVIII. Амплификация трансгена позволила удвоить уровень секреции делеционного варианта фактора VIII, продуцируемого в поликлональной клеточной популяции, и получить клональную клеточную линию, стабильно секретирующую делеционный вариант фактора VIII (до 0.52 МЕ/мл) при суспензионном культивировании в среде определенного химического состава, не содержащей продуктов животного происхождения. Получены четыре моноклональных антитела, узнающие тяжелую цепь фактора VIII и пригодные для адсорбции делеционного варианта фактора VIII непосредственно из культуральной среды и последующей элюции биологически активного фактора VIII с выходом более 85%. Полученные линия-продуцент и моноклональные антитела могут использоваться для разработки схемы промышленного культивирования и очистки рекомбинантного фактора VIII. В дальнейшем планируется получить более продуктивные клеточные линии при помощи невирусных промоторов и укороченной кДНК фактора VIII.
- Добавил в систему: Габибов Александр Габибович