СТАБИЛЬНАЯ ЭКСПРЕССИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ФАКТОРА СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ VIII В КЛЕТКАХ CHO С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АМПЛИФИКАЦИИ ТРАНСГЕНА, ИНИЦИИРОВАННОЙ МЕТОТРЕКСАТОМстатья

Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science

Работа с статьей


[1] СТАБИЛЬНАЯ ЭКСПРЕССИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ФАКТОРА СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ viii В КЛЕТКАХ cho С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АМПЛИФИКАЦИИ ТРАНСГЕНА, ИНИЦИИРОВАННОЙ МЕТОТРЕКСАТОМ / Н. А. Орлова, С. В. Ковнир, И. И. Воробьев и др. // Acta Naturae (русскоязычная версия). — 2012. — Т. 4, № 1. — С. 96–104. Больные гемофилией А - наследственным нарушением свертывания крови - нуждаются в регулярном применении препаратов фактора свертывания крови VIII. Рекомбинантный фактор VIII, продуцируемый в клетках линий СНО или ВНК, эквивалентен природному фактору VIII плазмы крови и широко используется в современной клинической практике. Получение биосимилярного рекомбинантного фактора VIII требует создания высокопродуктивной клональной клеточной линии и получения моноклональных антител, пригодных для аффинной очистки продукта. Изучена возможность амплификации трансгенов полноразмерного и делеционного вариантов фактора VIII, встроенных под контролем цитомегаловирусного промотора в геном трансфицированных клеток, под действием метотрексата. Установлено, что уровень секреции делеционного варианта фактора VIII в 6.5 раза выше, чем природного FVIII. Амплификация трансгена позволила удвоить уровень секреции делеционного варианта фактора VIII, продуцируемого в поликлональной клеточной популяции, и получить клональную клеточную линию, стабильно секретирующую делеционный вариант фактора VIII (до 0.52 МЕ/мл) при суспензионном культивировании в среде определенного химического состава, не содержащей продуктов животного происхождения. Получены четыре моноклональных антитела, узнающие тяжелую цепь фактора VIII и пригодные для адсорбции делеционного варианта фактора VIII непосредственно из культуральной среды и последующей элюции биологически активного фактора VIII с выходом более 85%. Полученные линия-продуцент и моноклональные антитела могут использоваться для разработки схемы промышленного культивирования и очистки рекомбинантного фактора VIII. В дальнейшем планируется получить более продуктивные клеточные линии при помощи невирусных промоторов и укороченной кДНК фактора VIII.

Публикация в формате сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл скрыть