Спектры биолюминесценции нативной и мутантной люцифераз светляков как функция рНстатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Информация о цитировании статьи получена из
Scopus
Статья опубликована в журнале из перечня ВАК
Статья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 22 августа 2019 г.
Аннотация:Получены спектры биолюминесценции при рН 5,6-10,2 для рекомбинантной люциферазы светляков Luciola mingrelica и ее мутантной формы с точечной заменой His433Tyr. Показано, что спектры биолюминесценции являются суперпозицией спектров трех форм электронно-возбужденного продукта реакции (оксилюцифе-рина): кетона (λmax =618 нм), енола (λ.max = 587 нм) и енолят-иона (λ.max = 556 нм). Отмечено, что сдвиг λmax в красную область на 40 нм для мутантной люциферазы в рН-оптимуме активности фермента (рН 7,8) объясняется изменением относительного содержания различных форм оксилюциферина за счет сдвига равновесий кетон ↔ енол ↔ енолят. Построена компьютерная модель комплекса люцифераза-оксилюциферин- AMP, на основании которой высказано предположение о локализации ключевых аминокислотных остатков, участвующих в поддержании таких равновесий. Построены компьютерные модели участка белка вблизи остатка His433 для исходной и мутантной люцифераз. Сравнение этих моделей позволяет сделать вывод, что мутация His433Tyr увеличивает подвижность полипептидной петли, связывающей N- и С-домены люциферазы. В результате увеличивается подвижность аминокислотных остатков С-домена, входящих в микроокружение излучателя, что может быть причиной наблюдаемых различий в спектрах биолюминесценции исходной и мутантной люцифераз.