Влияние замены остатков Met на остаток Leu на каталитические свойства, окислительную и температурную стабильности оксидазы D-аминокислот дрожжей. Вестник Московского университета, Серия 2: Химия

Атрошенко, Д.Л.; Голубев, И.В.; Савин, С.С.; Тишков, В.И.

Авторы: Атрошенко Д.Л., Голубев И.В., Савин С.С., Тишков В.И.
Журнал: Вестник Московского университета. Серия 2: Химия
Том: 57
Номер: 4
Год издания: 2016
Издательство: Издательский дом МГУ
Местоположение издательства: Москва
Первая страница: 252
Последняя страница: 262
Аннотация: Окислительная стабильность ферментов определяется в первую очередь остатками Cys и Met. В случае оксидазы D-аминокислот (DAAO, КФ 1.4.3.3) из дрожжей Trigonopsis variabilis (TvDAAO) методом направленного мутагенеза получены три мутеина с точечными заменами остатка Met на остаток Leu. Выбор положений для введения замены сделан на основе множественного выравнивания аминокислотных последовательностей DAAO из разных источников, а также анализа трехмерной структуры TvDAAO. Для полученных мутантов изучены каталитические свойства, а также температурная и окислительная стабильность. Во всех случаях замена привела к изменению у мутантных ферментов профиля субстратной специфичности. Наблюдается заметное увеличение констант Михаэлиса для небольших субстратов и уменьшению Км для D-аминокислот с объемным боковым радикалом. Показано, что в результате одной из замен происходит повышение температурной стабильности TvDAAO в 2–3 раза по сравнению с ферментом дикого типа. Разработана методика определения стабильности TvDAAO к действию пероксида водорода. Изучена окислительная стабильность фермента дикого типа и полученных мутантных TvDAAO.Установлено, что во всех случаях замена остатка Met на остаток Leu незначительно повлияла на окислительную стабильность фермента.
Добавил в систему: Тишков Владимир Иванович

	ИСТИНА	Войти в систему Регистрация
	ИСТИНА ИНХС РАН
	Главная Поиск Статистика О проекте Помощь

ИСТИНА

ИСТИНА ИНХС РАН

Прикрепленные файлы