Аннотация:Важной проблемой при лечении ВИЧ-инфекции является возникновение лекарственно устойчивых форм вируса, что делает актуальной разработку новых подходов к ингибированию ВИЧ-1, способных свести к минимуму появление резистентных штаммов. Решение этой проблемы невозможно без детального понимания механизмов всех стадий репликации вируса и выявления новых мишеней для антиретровирусной терапии. Наименее изученным этапом репликации ВИЧ-1 является репарация повреждений, возникающих в геноме клетки при интеграции в нее кДНК вируса. Без постинтеграционной репарации генома репликация вируса невозможна. Считается, что такая репарация осуществляется клеточными белками, однако точно неизвестно, какие именно клеточные белки вовлечены в этот процесс. Мы исследовали участие в постинтеграционной репарации компонентов комплекса ДНК-зависимой протеинкиназы (DNA-PK): белков Ku70, Ku80 и каталитической субъединицы DNA-PK cs. Для оценки эффективности репарации мы разработали специальный вариант количественной ПЦР. Оказалось, что понижение уровня любого из компонентов DNA-PK в клетках HEK293T существенно снижает эффективность репарации. Важно, что ингибирование фосфорилирующей активности DNA-PK также снижает степень репарации, причем в разных клеточных линиях. Комплекс DNA-PK запускает репарацию двуцепочечных разрывов ДНК по пути негомологичного соединения концов (NHEJ) за счет взаимодействия гетеродимера Ku70/Ku80 с концом ДНК в месте разрыва. Однако при интеграции не возникает двуцепочечных разрывов, поэтому было неясно, как DNA-PK может участвовать в постинтеграционной репарации. Нам удалось показать, что репарация начинается с привлечения комплекса DNA-PK к месту повреждения генома за счет прямого взаимодействия белка Ku70 с интегразой ВИЧ-1, осуществляющей процесс интеграции ДНК. Таким образом, нам впервые удалось доказать участие DNA-PK в процессе постинтеграционной репарации клеточного генома и показать, что для инициации этого процесса необходимо формирование комплекса белка Ku70 с интегразой ВИЧ-1. Следовательно, этот комплекс может рассматриваться как новая мишень для разработки ингибиторов репликации ВИЧ-1.
