|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Структурно-функциональные исследования оксидоредуктазстатья
- Авторы: Тишков В.И., Пометун А.А., Зарубина С.А., Каргов И.С., Виролайнен Т.С., Атрошенко Д.Л., Комарова Н.В., Голубев И.В., Хушпульян Д.М., Захарова Г.С., Чубарь Т.А., Газарян И.Г., D'Oronzo E., Facheris S., Secundo F., Савин С.С.
- Журнал: Acta Naturae (русскоязычная версия)
- Том: 2
- Год издания: 2016
- Издательство: Парк-медиа
- Местоположение издательства: М.
- Первая страница: 34
- Последняя страница: 34
- Аннотация: Оксидоредуктазы играют важную физиологическую роль и широко используются на практике. В нашей лаборатории проводятся систематические исследования NAD+-зависимых формиатдегидрогеназ (ФДГ), оксидазы D аминокислот (ДААО) и пероксидаз из корней хрена и листьев табака (HRP и ТОР соответственно). Для структурно-функциональных исследований используется метод рационального дизайна, который заключается в применении направленного мутагенеза, а выбор перспективных для замены аминокислотных остатков основа на анализе трехмерных структур и биоинформационном поиске в базах данных. В случае формиатдегидрогеназ данных подход был применен для ФДГ из бактерий Pseudomonas sp.101, Staphylococcus aureus, пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae, термотолерантных дрожжей Ogataea parapolymorpha (OpaFDH), сои Glycine max и др. В результате были получены мутантные ферменты в улучшенными значениями Км и kcat, повышенной термостабильностью как в водных буферных растворах и водных растворах мочевины, так и в ионных жидкостях и двухфазных системах на основе вода-полиэтиленгликоль-соль. Также были полученные высокоактивные мутантные ФДГ с измененной коферментной специфичностью. Для оксидазы D-аминокислот были получены мутантные ферменты с более узким и направленным спектром субстратной специфичности, а также получены биокатализаторы с увеличенной в несколько раз активностью в реакции окисления цефалоспорина С – источника получения 7-аминоцефалоспорановой кислоты, исходного синтона в производстве полусинтетических цефалоспоринов. В случае растительных пероксидаз были получены мутантные ферменты с повышенной стабильностью в реакции хемилюминесцентного окисления люминола. Изучена роль ионов кальция в поддержании структуры и проявлении каталитичесской активностью. Работа выполнена при финансовой поддержки Российского научного фонда (грант 16-14-00043, Российского фонда фундаментальных исследований (гранты 13-04-02013-а, 14-04-00865-a, 14-04-01625-a, 14-04-01665-a, 14-04-31194-мол_а, 14-04-32011-мол_а, 14-04-32042-мол_а,14-04-32064-мол_а, 15-54-78035 (совместно с грантом Итальянского Национального исследовательского совета 421-09-03-2015), 16-34-01320-мол_а) и Гранта Президента РФ для государственной поддержки молодых российских ученых – кандидатов наук и докторов наук (МК-2304.2014.4).
- Добавил в систему: Тишков Владимир Иванович