ДНК с 2-пиридилдитиогруппой при С2'-атоме – перспективные инструменты для фиксации белка MutS с сохранением его функциональной активности

Перри, С.А.; Кубарева, Е.А.; Монахова, М.В.; Трикин, Р.М.; Косарецкий, Е.М.; Романова, Е.А.; Метелев, В.Г.; Фридхофф, П.; Орецкая, Т.С.

Авторы: Перри С.А., Кубарева Е.А., Монахова М.В., Трикин Р.М., Косарецкий Е.М., Романова Е.А., Метелев В.Г., Фридхофф П., Орецкая Т.С.
Журнал: Биоорганическая химия
Том: 47
Номер: 2
Год издания: 2021
Издательство: Российская академия наук
Местоположение издательства: Москва
Первая страница: 235
Последняя страница: 249
Переводные версии: DNA with a 2-pyridyldithio group at the C2' atom: a promising tool for the crosslinking of the MutS protein preserving its functional activity
DOI: 10.31857/S0132342321020202
Аннотация: Нековалентные ДНК-белковые взаимодействия лежат в основе жизнедеятельности клеток. Ковалентные связи между ДНК и белком, возникающие при воздействии различных эндогенных и экзогенных факторов, а также химиотерапевтических агентов, как правило, нарушают нормальное функционирование ДНК-связывающих белков. Олигодезоксирибонуклеотиды с реакционноспособной группировкой используются как инструменты для подтверждения элементов структуры и механизмов действия таких белков. Для фиксации белка MutS, являющегося сенсором системыMMR (система репарации “мисматчей”, mismatch repair system) из Escherichia coli, через остаток цистеина предложено использовать ДНК с 2′-дезокси-2′-[3-(2-пиридилдитио)пропионамидо]группой в составе нуклеозида в заданном положении олигомерной цепи и с двумя флуорофорами. Дуплекспредставляет собой набор комплементарных олигонуклеотидов с разрывами в “верхней” и “нижней” цепях. Это позволяет варьировать место введения реакционноспособной группировки, синтезируя только центральный фрагмент ДНК минимальной длины. Конъюгат MutS c ДНК был получен реакцией тиол-дисульфидного обмена с количественным выходом и очищен от непрореагировавшей ДНК с использованием эксклюзионной хроматографии. Методом флуоресцентного резонансного переноса энергии показано, что белок MutS в составе конъюгата сохраняет способность изменять свою конформацию и конформацию ДНК, что свидетельствует о сохранении его активности.
Добавил в систему: Монахова Майя Викторовна

	ИСТИНА	Войти в систему Регистрация
	ИСТИНА ИНХС РАН
	Главная Поиск Статистика О проекте Помощь

ИСТИНА

ИСТИНА ИНХС РАН

ДНК с 2-пиридилдитиогруппой при С2'-атоме – перспективные инструменты для фиксации белка MutS с сохранением его функциональной активностистатья

Прикрепленные файлы