|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Конструирование и функциональный анализ рекомбинантных штаммов Mycolicibacterium smegmatis, несущих гены бациллярных цитохромов CYP106A1 и CYP106A2статья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАКСтатья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 8 апреля 2022 г.
- Авторы: Карпов М.В., Николаева В.М., Фокина В.В., Шутов А.А., Казанцев А.В., Стрижов Н.И., Донова М.В.
- Журнал: Биотехнология
- Том: 37
- Номер: 6
- Год издания: 2021
- Издательство: ГосНИИгенетика
- Местоположение издательства: М.
- Первая страница: 34
- Последняя страница: 47
- DOI: 10.21519/0234-2758-2021-37-6-34-47
- Аннотация: Штамм Mycolicibacterium smegmatis mc2155 использован в качестве организма-хозяина для экспрессии генов чужеродных цитохром P450-зависимых монооксигеназ. Для этого геном бактерии модифицировали путем внесения делеций в гены kshB и kstD, кодирующие ключевые этапы деструкции стероидного ядра. Сконструировано три набора генетических конструкций, позволяющих гетерологически экспрессировать гены, кодирующие цитохромы P450: CYP106A1 из Bacillus megaterium DSM319 и CYP106A2 из B. megaterium ATCC13368, — в клетках M. smegmatis mc2155 (ΔkshBΔkstD). Рекомбинантные плазмиды содержали моноцистронные экспрессионные кассеты генов цитохромов (pNS31 и pNS32), трицистронные кассеты генов цитохромов совместно с кДНК-копиями генов адренодоксина и андренодоксинредуктазы коры надпочечников быка (pNS33 и pNS34) или моноцистронные кассеты генов химерных цитохромов, слитых с ДНК-последовательностью, кодирующей редуктазный домен цитохрома CYP116B2 из почвенной бактерии Rhodococcus sp. NCIMB 9784 (pNS35 и pNS36). Полученные с их использованием рекомбинантные штаммы миколицибактерий в ростовых условиях селективно моногидроксилировали андростендион (АД). Структуру продукта идентифицировали методами масс-спектрометрии, 1H- и 13C-ЯМР-спектроскопии как 15альфа-гидроксиандростендион (15альфа-OH-АД). Максимальный уровень продукции 15альфа-OH-АД (17,3±1,5 мг/л) зарегистрирован при использовании рекомбинантного штамма M. smegmatis mc2155 (ΔkshBΔkstD) (pNS32), экспрессирующего одиночный ген cyp106A2 из B. megaterium ATCC13368. Показано, что хозяйские белки M. smegmatis mc2155 способны снабжать электронами гетерологичные цитохромы для реализации их гидроксилирующей активности. Результаты имеют приоритетный характер, расширяют представления о гидроксилировании стероидных соединений бактериальными цитохромами CYP106A1/A2 и важны для создания микробных штаммов-продуцентов ценных гидроксистероидов.
- Добавил в систему: Казанцев Алексей Витальевич