Моделирование гипоксии в клетках рака почки при помощи CRISPR/Cas9-редактированиястатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАК
Статья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 8 апреля 2022 г.
Аннотация:Неконтролируемый рост клеточной массы при онкологических заболеваниях приводит к усиленному ангиогенезу, но даже это не помогает раковым клеткам полностью удовлетворить потребность в питательных веществах и?кислороде. Гипоксия является сопутствующим раковой трансформации процессом и вызывает изменение профиля метилирования ДНК в солидных опухолях, в том числе гиперметилирования промоторов генов онкосупрессоров. Частично это связано со снижением активности Tet-белков в условиях недостатка свободных радикалов кислорода. Ключевое молекулярное событие при индукции гипоксии - стабилизация, накопление и ядерная транслокация транскрипционного фактора HIF1a. На основе линии светлоклеточного рака почки Caki1 мы получили и охарактеризовали модельную клеточную линию со стабилизированным белком HIF1a, которая позволит исследовать механизмы изменения уровня метилирования ДНК при неизмененной активности Tet-белков, но при сохранении транскрипционного профиля генов, характерного для гипоксии. При помощи системы редактирования ДНК CRISPR/CAS9 мы отредактировали ген VHL. Мутантный белок VHL содержит разрушенную альфа-спираль на C-конце и не может участвовать в молекулярном пути протеосомной деградации фактора HIF1a; это приводит к накоплению его в ядре и к активации соответствующих генов мишеней. Анализ транскрипции генов показал, что в?этой клеточной линии наблюдается индукция генов, характерных для гипоксии. Используя полученную модель Сaki-1/VHLmut, возможно разделять эффекты, вызванные подавляемыми кислородом гидроксилазами семейства Tet и другими механизмами метилирования/деметилирования ДНК при гипоксии.