|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Влияние аргинина на агрегацию белка ядерного экспорта NEP вируса гриппа Атезисы доклада
- Авторы: Головко А.О., Королева О.Н., Друца В.Л.
- Сборник: ХХ Всероссийская конференция молодых ученых-химиков (с международным участием)
- Тезисы
- Год издания: 2017
- Место издания: Изд-во ННГУ им. Н.И. Лобачевского Нижний Новгород
- Первая страница: 80
- Последняя страница: 80
- Аннотация: Белок ядерного экспорта NEP вируса гриппа А участвует в одном из важнейших процессов жизненного цикла вируса - экспорте вирусного генома из ядра в цитоплазму. Ранее нами была сконструирована бактериальная экспрессионная система для получения белка NEP в чистом виде. Однако оказалось, что он чрезвычайно склонен к агрегации. По данным литературы агрегация белков (особенно рекомбинантных) является весьма распространенным явлением. Для предотвращения этого явления использовали различные низкомолекулярные добавки. К числу наиболее эффективных следует отнести аргинин, который (как было показано на ряде белков различной природы) способствует разрушению агрегатов и предотвращению их образования без заметной денатурации самого белка [1]. В настоящей работе были предприняты исследования влияния аргинина на агрегацию белка NEP в растворе. Выделение белка, содержащего на С-конце His(6)-модуль (NEP-C-His(6)), осуществляли аффинной хроматографией на Ni-NTA-агарозе. Соли L-Arg (глутамат и фосфат) добавляли к растворам, содержащим белок, на различных этапах его выделения. Анализ растворов на наличие агрегатов осуществляли методом динамического рассеяния света (DLS). Оказалось, что наилучшие результаты достигаются в случае добавления аргинина на стадии элюирования белка с носителя. Показано, что оптимальными являются концентрации 50 мМ в случае глутамата аргинина и 100 мМ – в случае фосфата. При этом крупных агрегатов в конечных препаратах белка практически не обнаружено. Зафиксировано лишь незначительное количество олигомеров, не превышающих размером 100 нм. Таким образом, соли аргинина (50-100 мМ) могут быть использованы для стабилизации препаратов белка NEP при их длительном хранении и использовании в экспериментах in vitro. Pабота выполнена пpи финанcовой поддержке Pоccийcкого фонда фундаментальныx иccледований (гpанты №№ 15-32-20629 и 13-04-01504). [1] Schneider C.P., Shukla D., Trout BL. // J Phys Chem. 2011. V. 115. P. 7447-7458.
- Добавил в систему: Nuwanda