|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Поверхностный фенотип и функциональная активность Т-лимфоцитов с трансгенной β-цепью Т-клеточного рецепторастатья
- Авторы: Силаева Ю.Ю., Калинина А.А., Персиянцева Н.А., Хромых Л.М., Казанский Д.Б.
- Журнал: Russian Scientist
- Том: 1
- Номер: 2
- Год издания: 2017
- Первая страница: 24
- Последняя страница: 25
- Аннотация: Т-лимфоциты играют ключевую роль в осуществлении противоопухолевого иммунного ответа. Способность Т-лимфоцита осуществлять иммунный ответ зависит от специфичности его Т- клеточного рецептора и функционального состояния, в котором находится клетка. В организме человека и животных одновременно присутствует большое количество Т-лимфоцитов, несущих уникальные Т-клеточные рецепторы, поэтому исследование взаимосвязи структуры индивидуального Т-клеточного рецептора с функциональной активностью и поверхностным фенотипом Т-лимфоцита затруднено. Цель работы Целью данной работы является исследование взаимосвязи между структурой В-цепи Т- клеточного рецептора и функциональными и фенотипическими характеристиками Т- лимфоцита. Материалы и методы Работы проводились на базе вивария ФГБУН ИБГ РАН и вивария ФГБУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина Минздрава России. Первичные трансгенные животные получены методом микроинъекции раствора ДНК в пронуклеус оплодотворённой яйцеклетки. Наличие трансгена в геноме подтверждали методом ПЦР. Для оценки количества периферических Т-лимфоцитов, экспрессирующих трансген, мононуклеары периферической крови трансгенных животных окрашивали моноклональными флуоресцентно мечеными антителами к вариабельному участку бета-цепи Т-клеточного рецептора Vbeta6 и анализировали на проточном цитофлуориметре. Для получения чистых линий трансгенных животных на генетической основе линии B10.D2(R101) было проведено не менее 7 возвратных скрещиваний с мышами линии B10.D2(R101). Для оценки профиля экспрессии поверхностных активационных маркеров периферических Т-лимфоцитов трансгенных животных тотальную популяцию селезёнки или лимфатических узлов окрашивали моноклональными флуоресцентно мечеными антителами, а затем анализировали на проточном цитофлуориметре. Способность Т-лимфоцитов трансгенных животных к аллогенному иммунному ответу in vitro оценивали с помощью реакции смешанной культуры лимфоцитов. Для оценки противоопухолевого иммунного ответа in vivo трансгенных животных внутрибрюшинно иммунизировали клетками тимомы EL-4 в количестве 20 млн., через 12 дней оценивали относительное количество эффекторных клеток (CD62L-CD44+) CD8+ в селезёнке. Для оценки продолжительности жизни трансгенных животных иммунизацию клетками аллогенной опухоли проводили так же. Результаты Для исследования механизмов, лежащих в основе приобретения Т-лимфоцитом того или иного поверхностного фенотипа, мы создали две линии трансгенных животных, экспрессирующих В-цепь Т-клеточного рецептора гибридомы 1D1. Экспрессия трансгенной В-цепи TCR гибридомы 1D1 не вызывает каких-либо нарушений в развитии Т-лимфоцитов. Трансгенные Т-клетки успешно проходят внутритимусную селекцию и выходят на периферию. Для трансгенных Т- лимфоцитов не существует предпочтительной линии дифференцировки (CD4 или CD8). Оказалось, что экспрессия трансгенной В-цепи Т-клеточного рецептора значительно изменяет баланс субпопуляций наивных и активированных Т-клеток в организме. 70-75% CD8+ Т-лимфоцитов, экспрессирующих трансгенную В- цепь TCR, обладают поверхностным фенотипом наивных Т-клеток (CD44-CD62L+). В то же время значительная доля Т-лимфоцитов, экспрессирующих эндогенные цепи TCR, находится в активированном состоянии. Этот эффект наблюдается у мышей обеих трансгенных линий, что свидетельствует о том, что он не является следствием каких-либо сторонних эффектов трансгенеза. В условиях лимфопении трансгенные Т- лимфоциты приобретают поверхностный фенотип CD44+. Экспрессия трансгенной В-цепи Т- клеточного рецептора гибридомы 1D1 приводит к значительному снижению уровня аллогенных ответов in vitro и in vivo. Слабый аллогенный ответ, развивающийся в организме трансгенных животных, делает невозможным отторжение клеток аллогенной тимомы EL-4, однако приводит к иммунной селекции опухолевых клеток. Заключение Исследована взаимосвязь поверхностного активационного фенотипа CD8+ Т-клеток с их функциональными свойствами, а также механизмы, лежащие в основе приобретения Т-лимфоцитом того или иного поверхностного фенотипа. Эти результаты могут иметь важное значение для понимания процессов формирования пулов Т-клеток с различными функциональными характеристиками и профилем экспрессии поверхностных активационных маркеров.
- Добавил в систему: Калинина Анастасия Андреевна