Исследование механизма коферментной специфичности фенилацетонмонооксигеназы из Thermobifida fusca методом направленного мутагенеза

Паршин, П.Д.; Мартысюк, У.А.; Атрошенко, Д.Л.; Попинако, А.В.; Савин, С.С.; Пометун, Е.В.; Тишков, В.И.; Пометун, А.А.

Авторы: Паршин П.Д., Мартысюк У.А., Атрошенко Д.Л., Попинако А.В., Савин С.С., Пометун Е.В., Тишков В.И., Пометун А.А.
Журнал: Вестник Московского университета. Серия 2: Химия
Том: 63
Номер: 5
Год издания: 2022
Издательство: Издательский дом МГУ
Местоположение издательства: Москва
Первая страница: 334
Последняя страница: 343
Аннотация: Фенилацетонмонооксигеназа из Thermobifida fusca (КФ 1.14.13.92, PAMO) принадлежит к семейству монооксигеназ Байера–Виллигера и катализирует реакции окисления различных ароматических кетонов до соответствующих сложных эфиров с использованием NADPH в качестве кофактора. В работе проанализирована структура центра связывания кофактора, выбраны наиболее важные для узнавания фосфатной группы кофактора аминокислотные остатки и проведено моделирование аминокислотных замен, потенциально способных привести к изменению коферментной специфичности фермента от NADPH к NADH. На основе проведенного моделирования предложены наиболее перспективные аминокислотные замены T218D, T218E, K336A, K336R. С помощью направленного мутагенеза получены генетические конструкции, которые содержат гены, кодирующие PAMO с соответствующими аминокислотными заменами, проведены экспрессия и очистка ферментов. Полученные мутантные PAMO способны связывать NADH, но не обладают способностью катализировать окисление бензилацетона в присутствии NADH и демонстрируют ухудшение констант Михаэлиса по NADPH. Каталитические константы изучаемых мутантных ферментов немного уменьшаются, однако это изменение находится в пределах погрешности эксперимента
Добавил в систему: Тишков Владимир Иванович

	ИСТИНА	Войти в систему Регистрация
	ИСТИНА ИНХС РАН
	Главная Поиск Статистика О проекте Помощь

ИСТИНА

ИСТИНА ИНХС РАН

Исследование механизма коферментной специфичности фенилацетонмонооксигеназы из Thermobifida fusca методом направленного мутагенезастатья

Прикрепленные файлы