Аннотация:NAD+-зависимая формиадегидрогеназа (ФДГ, КФ 1.2.1.2) метилотрофных бактерий Pseudomonas sp.101 (PseFDH) имеет одну из самых высоких термостабильностей среди всех известных ферментов этой группы. Введение в PseFDH ряда аминокислотных замен позволило получить многоточечный мутантный фермент PseFDH SM4S с еще более высокой температурной и химической стабильностью. Ранее нами было показано, что введение в PseFDH SM4S дополнительных отдельных точечных замен S131A, или S160A, или E170D приводило к еще большей стабилизации фермента. В данной работе на основе мутанта PseFDH SM4S S131A получены новые мутантные ФДГ, в которых по сравнению с PseFDH SM4S дополнительно введены двойная, тройная и четверная замены S131A/E170D (М2), S131A/S160A/E170D (М3) и S131A/S160A/E170D/S145A (PseFDH SM4A М3). Новые мутантные PseFDH были суперэкспрессированы в клетках E.coli, очищены и охарактеризованы. Замены S131A/E170D и S131A/S160A/E170D обеспечивали дальнейшее повышение термостабильности. Введение замены S145A в PseFDH SM4S M3 приводит к значительному снижению KMNAD+ и KMHCOO- при сохранении каталитической константы на прежнем уровне. Данная мутантная форма может быть успешно использована в системах регенерации NADH, а также для детекции NAD+ и формиата в биологических системах.