Особенности метилирования CpG-сайтов в участках промотора с-MYC и в модельных ДНК, содержащих G-квадруплексные структуры

Генатуллина, А.И.; Лойко, А.Г.; Громова, Е.С.

Авторы: Генатуллина А.И., Лойко А.Г., Громова Е.С.
Сборник: Материалы Международного молодежного научного форума «Ломоносов-2023»
Редакторы: Алешковский Иван Андреевич, Андриянов Андрей Владимирович, Антипов Евгений Александрович, Зимакова Екатерина Игоревна
Серия: География
Тезисы
Год издания: 2023
Издательство: ООО "МАКС Пресс"
Местоположение издательства: Москва
Первая страница: 1166
Последняя страница: 1166
Аннотация: Метилирование ДНК играет важную роль в регуляции экспрессии генов эукариот. У млекопитающих метилированию, осуществляемому ДНК-метилтрансферазами (МТазами), подвергаются остатки цитозина в составе CpG-сайтов ДНК. За de novoметилирование отвечает МТаза Dnmt3a. Гиперметилирование промоторов геновсупрессоров раковых опухолей и гипометилирование онкогенов приводит к потере контроля над клеточным циклом и развитию онкологических заболеваний. Вблизи CpGсайтов в промоторных областях генов располагаются гуанин-богатые последовательности, формирующие G-квадруплексы (G4). Данные структуры могут быть причиной нарушения метилирования в промоторных областях генома, но эта гипотеза до сих пор не доказана. Целью работы стало исследование функционирования каталитического доменаМТазы мыши Dnmt3a (Dnmt3a-CD) в присутствии G4. Был использован флуоресцентномеченный канонический ДНК-дуплекс 58/58, имитирующий фрагмент промотора гена сMYC и полученный на его основе оригинальный ДНК-дуплекс 35/62_G4, способный формировать в центре параллельную структуру G4 (рис. 1). Конструкция позволила наблюдать за метилированием CpG-сайта, расположенного в участке узнавания эндонуклеазы R.Hin6I, методом защиты от расщепления этим ферментом с последующим анализом продуктов реакции в полиакриламидном геле. Были также рассмотрены модельные ДНК-дуплексы 76/95_G4 и 32/51_G4, в которых искусственно варьировали расстояние между метилируемым CpG-сайтом и структурой G4. При работе с участком промотора c-MYC установлено, что образование G4 снижает степень метилирования 35/62_G4 в 5 раз по сравнению с 58/58. При сравнениифункционирования Dnmt3a-CD в 76/95_G4 и 32/51_G4 выяснилось, что сближение G4 и метилируемого CpG-сайта приводит к снижению эффективности реакции. Таким образом, формирование G4 влияет на функционирование МТаз, степень этого влияния зависит от расстояния между CpG-сайтом и G4. Снижение метилирующей активности может быть связано со стерическими затруднениями при посадке белка на ДНКсубстрат или с образованием комплекса между Dnmt3a-CD и G4. Формирование G4 в промоторе онкогена с-MYC можно рассматривать как одну из причин гипометилирования и, как следствие, гиперэкспрессии белка MYC, что приводит к развитию онкологических заболеваний.
Добавил в систему: Генатуллина Аделя Искандаровна

	ИСТИНА	Войти в систему Регистрация
	ИСТИНА ИНХС РАН
	Главная Поиск Статистика О проекте Помощь

ИСТИНА

ИСТИНА ИНХС РАН

Особенности метилирования CpG-сайтов в участках промотора с-MYC и в модельных ДНК, содержащих G-квадруплексные структурытезисы доклада

Прикрепленные файлы