NAD+-зависимая формиатдегидрогеназа  из термотолерантных дрожжей Ogataea parapolymorpha: свойства и белковая инженерия N-концевой последовательности. Биохимия

Пометун, А.А.; Шапошников, Л.А.; Зубанова, С.А.; Ковалевский, Р.П.; Атрошенко, Д.Л.; Пометун, Е.В.; Савин, С.С.; Тишков, В.И.

Авторы: Пометун А.А., Шапошников Л.А., Зубанова С.А., Ковалевский Р.П., Атрошенко Д.Л., Пометун Е.В., Савин С.С., Тишков В.И.
Журнал: Биохимия
Том: 88
Номер: 9
Год издания: 2023
Издательство: ФГБУ "Издательство "Наука"
Местоположение издательства: Москва
Первая страница: 1
Последняя страница: 14
Аннотация: Ранее в нашей лаборатории был клонирован ген формиатдегидрогеназы (ФДГ, КФ 1.2.1.2) из термотолерантных метилотрофных дрожжей Ogataea parapolymorpha DL 1 (OpaFDH). Рекомбинантный фермент с дополнительным аминокислотным остатком глицина (OpaFDH_GK) был получен в клетках Escherichia coli в активной и растворимой форме с выходом более 1 г с одного литра среды. В настоящей работе проведено подробное сравнение этого фермента с ФДГ из других источников. Среди формиатдегидрогеназ из эукариот OpaFDH имеет самую высокую термостабильность. Для выяснения влияния N-концевого остатка на свойства фермента также были получены варианты OpaFDH_K (идентичный природному) и OpaFDH_AK, содержащий на N-конце дополнительный остаток аланина. Показано, что добавление к N-концу остатка Ala уменьшает в 4 раза константу скорости термоинактивации по сравнению с добавлением остатка Gly. Добавление еще 6 остатков гистидина на N-конец OpaFDH_AK приводит к ускорению очистки, практически не влияет на кинетические параметры, но несколько снижает температурную стабильность, которая, однако, может быть восстановлена до уровня OpaFDH_AK добавлением 0,5 М NaCl.
Добавил в систему: Тишков Владимир Иванович

	ИСТИНА	Войти в систему Регистрация
	ИСТИНА ИНХС РАН
	Главная Поиск Статистика О проекте Помощь

ИСТИНА

ИСТИНА ИНХС РАН

NAD+-зависимая формиатдегидрогеназа из термотолерантных дрожжей Ogataea parapolymorpha: свойства и белковая инженерия N-концевой последовательности. Биохимиястатья

Прикрепленные файлы