|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Новая двухдоменная лакказа со средним окислительно-восстановительным потенциалом: физико-химические и структурные свойствастатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАКСтатья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 24 июля 2024 г.
- Авторы: Трубицина Л.И., Трубицин И.В., Лисов А.В., Габдулхаков А.Г., Заварзина А.Г., Белова О.В., Ларионова А.П., Тищенко С.В., Леонтьевский А.А.
- Журнал: Биохимия
- Том: 88
- Номер: 10
- Год издания: 2023
- Издательство: ФГБУ "Издательство "Наука"
- Местоположение издательства: Москва
- Первая страница: 2002
- Последняя страница: 2013
- DOI: 10.31857/S0320972523100184
- Аннотация: Ген ранее неисследованной двухдоменной лакказы был идентифицирован в геноме актинобакте-рии Streptomyces carpinensis ВКМ Ас-1300. Двухдоменная лакказа, названная ScaSL, была продуци-рована в гетерологичной системе экспрессии (штамм Escherichia coli M15 [pREP4]). Фермент былочищен до гомогенного состояния с использованием аффинной хроматографии. Лакказа ScaSL,как и большинство двухдоменных лакказ, проявляла активность в форме гомотримера. Однако,в отличие от большинства двухдоменных лакказ, она была активна и в мультимерных формах.Фермент проявлял максимальную активность при 80 °C и был термостабилен. Время полуинакти-вации ScaSL при 80 °C составило 40 мин. Лакказа окисляла нефенольное органическое соедине-ние 2,2′-азинобис(3-этилбензотиазолин сульфонат) (АБТС) с максимальной скоростью при рН 4,7,окисляла фенольное соединение 2,6-диметоксифенол с максимальной скоростью при pH 7,5.Стабильность лакказы наблюдалась в диапазоне рН 9–11. При рН 7,5 лакказа слабо ингибирова-лась азидом натрия, фторидом натрия и хлоридом натрия; при рН 4,5 лакказа полностью ингиби-ровалась 100 мМ азидом натрия. Значения Km и kcat фермента для АБТС составили 0,1 мМ и 20 с−1,а для 2,6-диметоксифенола – 0,84 мМ и 0,36 с−1 соответственно. ScaSL катализировала полимери-зацию гуминовых кислот и лигнина. Окислительно-восстановительный потенциал лакказы соста-вил 0,472 ± 0,007 В. Таким образом, лакказа ScaSL – первая охарактеризованная двухдоменнаялакказа со средним окислительно-восстановительным потенциалом. Кристаллическая структураScaSL была определена с разрешением 2,35 Å. Сравнительный анализ структур ScaSL и другихдвухдоменных лакказ позволил предположить, что средний потенциал ScaSL может быть свя-зан с конформационными различиями в положениях боковых групп аминокислот в позиции 230(в нумерации ScaSL), относящихся ко второй координационной сфере атома меди Т1-центра.
- Добавил в систему: Заварзина Анна Георгиевна
Прикрепленные файлы
| № | Имя | Описание | Имя файла | Размер | Добавлен |
|---|---|---|---|---|---|
| 1. | Полный текст | bcm_2002_2013_Trubitsina.pdf | 2,2 МБ | 8 ноября 2023 [AZavarzina] | |
| 2. | экспертное заключение | eks.zakl._Trubitsina.pdf | 303,8 КБ | 13 ноября 2023 [AZavarzina] |