|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Разработка природоподобных материалов на основе рекомбинантных спидроинов для тканевой инженериитезисы доклада
- Авторы: Богуш В.Г., Давыдова Л.И., Сидорук К.В., Свиридов Б.В., Новосадова Е.В., Сытина Е.В., Михайлова М.М., Долотов О.В., Дебабов В.Г.
- Сборник: МАТЕРИАЛЫ VI РОССИЙСКОГО НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА С МЕЖДУНАРОДНЫМ УЧАСТИЕМ «ТРАНСПЛАНТАЦИЯ И ДОНОРСТВО ОРГАНОВ»
- Том: 25
- Тезисы
- Год издания: 2023
- Место издания: Москва
- Первая страница: 168
- Последняя страница: 168
- Аннотация: Актуальность. Возрастает необходимость перехода от устаревшей методологии трансплантоло- гии – использования донорских органов человеческого и животного происхождения – к идеологии использования биоискусственных органов и тканей. Цель: разработка панели гибридных белков (ГБ) на основе рекомбинантных спидроинов (РС), содержащих биологически активные пептиды (БАП), для целей тканевой инженерии. Материалы и методы. Полноразмерные РС rS1/9 и rS2/12 выделяли из водонерастворимой фракции клеток штаммов продуцентов S. cerevisiae и очищали с помощью ионно обменной хро- матографии. ГБ, содержащие разные БАП, были сконструированы по одной схеме: H6 SUMO 1F1 G(SGG)4S (БАП), где H6 – his tag для очистки на Ni колонке; SUMO (Small Ubiquitin Like Modifier) – пептид – продукт гена Smt3 дрожжей, способствующий повышению выхода в клетках E. coli; 1F1 – мономер РС rS1/9, выполняющий роль «якоря» при взаимодействии с полноразмер- ными РС; G(SGG)4S – нейтральный линкер, способствующий экспозиции БАП над поверхностью матрикса; БАП – любой из клонированных БАП. В качестве БАП использованы: пептид RGDS (связывается с клеточными интегринами); гепарин связывающий пептид (HBP) (связывает раз- личные ростовые факторы и взаимодействует с синдеканами); пептид GRGGL (взаимодействует с нейральными молекулами клеточной адгезии NCAM); Lam – С концевой фрагмент α 5 лами- нина человека. Гены ГБ были синтезированы химически и клонированы в клетках E. coli. Все ГБ выделяли из клеток штаммов продуцентов и очищали с помощью металл хелатной аффинной хроматографии на Ni колонке. Растворы РС и ГБ смешивали в определенных соотношениях и ими покрывали поверхность полистирольных планшетов (2D матриксы) с последующей инкубацией в этаноле. Исследовали влияние различных БАП на адгезию и пролиферацию первичных мышиных дермальных фибробластов и эмбриональных фибробластов 3Т3, а также на дифференцировку ней- робластомы человека SH SY5Y и на рост клеток нейральных предшественников из человеческих индуцированных плюрипотентных клеток и их дифференцировку в нейроны. Результаты. На фибробластах отмечено увеличение в сравнении с контролем количества только РНК коллагена I, а количество РНК αSMA и TGF β были снижены на всех покрытиях, особенно на rS1/9+ГБ(Lam), где также выявлялось максимальное снижение количества РНК фибронектина и коллагена III – компонентов так называемого временного межклеточного матрикса. Это означает, что все покрытия не обладают профибротическим действием, то есть не будут вызывать образова- ние рубца при регенерации кожных травм. Подложка, состоящая из смеси полноразмерных РС и ГБ(RGDS), наиболее эффективно поддерживала направленную нейрональную дифференцировку клеток нейробластомы человека SH SY5Y. Также продемонстрировано влияние различных БАП на дифференцировку нейрональных клеток через активацию экспрессии генов, вовлеченных в норме в дифференцировку, что соответствует известной роли этих пептидов в процессах тканевой регенерации. Заключение. Впервые разработана генно инженерными методами панель слитых белков, содер- жащих фрагмент рекомбинантнтого спидроина и биологически активные пептиды, клонированные из природных белков межклеточного матрикса, которые в человеческом организме участвуют в регуляции многих процессов регенерации тканей. В экспериментах продемонстрировано, что определенные сочетания биологически активных пептидов вызывают активацию определенного типа клеток, что позволяет обеспечивать специфическую регенерацию соответствующих тканей
- Добавил в систему: Долотов Олег Валентинович