Новые инструменты для стабильной высокоэффективной экспрессии генов в бактериях Rhodococcusстатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАК
Статья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 12 июня 2024 г.
Аннотация:На основе ранее использовавшейся плазмиды pRY16 сконструирована новая бирепликонная Escherichia coli‒Rhodococcus плазмида pRY3-Rho-MCS, малокопийная в Rhodococcus и многокопийная в E. coli, стабильно наследуемая в родококках. Новая плазмида способна к конъюгативному переносу из E. coli в R. rhodochrous и R. qingshengii. Полученные штаммы R. rhodochrous и R. qingshengii с новой плазмидой стабильно сверхпродуцировали зеленый флуоресцентный белок turboGFP под контролем коринебактериального промотора Ptuf. Методом проточной цитофлуориметрии оценена эффективность экспрессии целевого гена в сконструированных штаммах и возможность использования этой технологии в поиске высокоактивных промоторов для экспрессии целевых генов в Rhodococcus. Количественно охарактеризована нестабильность наследования в R. rhodochrous исходной плазмиды pRY16, которая потенциально пригодна для разработки методов редактирования генома Rhodococcus spp., основанных на CRISPR/Cas. Сделан вывод, что полученные инструменты: плазмида pRY3-Rho-MCS и промотор Ptuf – обладают значительным потенциалом для применения в биотехнологии, в том числе для создания биокатализаторов, а также продуцентов бактериальных белков, трудно синтезируемых в E. coli и других модельных микроорганизмах.