Новый подход для исследования ингибиторов поли(ADP-рибоза)-полимеразы, основанный на использовании пермеабилизованных адгезированных клеток

Шрам, С.И.; Щербакова, Т.А.; Абрамова, Т.В.; Смирновская, М.С.; Баландина, А.И.; Куликов, А.В.; Швядас, В.К.; Сильников, В.Н.; Мясоедов, Н.Ф.; Нилов, Д.К.

Авторы: Шрам С.И., Щербакова Т.А., Абрамова Т.В., Смирновская М.С., Баландина А.И., Куликов А.В., Швядас В.К., Сильников В.Н., Мясоедов Н.Ф., Нилов Д.К.
Журнал: Биохимия
Том: 89
Номер: 9
Год издания: 2024
Издательство: ФГБУ "Издательство "Наука"
Местоположение издательства: Москва
Первая страница: 1562
Последняя страница: 1575
DOI: 10.31857/S0320972524090079
Аннотация: Ингибиторы поли(ADP-рибоза)-полимеразы (PARP) рассматриваются в качестве перспективных фармакологических агентов для лечения целого ряда заболеваний. В последнее время были выявлены разнообразные факторы и механизмы регуляции каталитической активности PARP и показано, что некоторые из них могут существенно влиять на эффективность действия ингибиторов данного фермента. В связи с этим актуальна разработка новых моделей и методов, отражающих клеточный контекст, в котором функционирует PARP. В представленной работе для исследования реакции поли(ADP-рибозил)ирования (PARилирования) предложено использовать необратимо пермеабилизованные дигитонином адгезированные клетки, что позволяет сохранить ядерную локализацию PARP и задавать необходимые концентрации субстрата (NAD+) и тестируемых соединений в клетке. Особенность подхода заключается в том, что перед пермеабилизацией клеточная PARP переводится в связанное с ДНК состояние в условиях, предотвращающих преждевременную инициацию реакции PARилирования. Исследования выполнены на культуре кардиомиобластов крысы Н9с2. Анализ активности PARPв пермеабилизованных клетках проводили путём измерения иммунофлуоресценции образующегося продукта – поли(ADP-рибозы). Метод апробирован при исследовании PARP-ингибиторного действия классического ингибитора 3-аминобензамида, а также ряда новых производных 7-метилгуанина. Обнаружено, что одно из них, 7,8-диметилгуанин, является более сильным ингибитором по сравнению с 7-метилгуанином, что объясняется дополнительным гидрофобным контактом с белком. Предложенный подход открывает новые перспективы для изучения механизмов регуляции активности PARP в клетке и может быть использован для высокопроизводительного скрининга веществ при поиске новых ингибиторов PARP.
Добавил в систему: Нилов Дмитрий Константинович

	ИСТИНА	Войти в систему Регистрация
	ИСТИНА ИНХС РАН
	Главная Поиск Статистика О проекте Помощь

ИСТИНА

ИСТИНА ИНХС РАН

Прикрепленные файлы