Динамика распределения модификаций гистонов H3K9me3 и H4K5ac и их солокализация с хроматинремоделирующим белком ATRX в доимплантационном эмбриогенезе мышитезисы доклада
Аннотация:Посттрансляционные функциональные модификации гистонов и процессы АТФ-зависимого ремоделинга хроматина остаются в центре внимания при исследовании регуляции экспрессии генов. Эмбрионы млекопитающих на начальных стадиях дробления являются традиционным объектом для анализа эпигенетических механизмов дифференциальной экспрессии генов, но при использовании подобных моделей внимание исследователей чаще всего концентрируется на стадии зиготы, когда происходит репрограммирование и объединение родительских геномов. Однако процессы интенсивных структурно-функциональных перестроек хроматинового компартмента продолжаются и на последующих стадиях доимплантационного развития. В связи с этим основной целью настоящей работы являлась иммуноцитохимическая локализация модификаций гистонов H3K9me3 и H4K5ac одновременно с хроматинремоделирующим белком ATRX в эмбрионах мыши на стадии ранней и поздней зиготы, поздней двухклеточной стадии, а также стадиях морулы и бластоцисты.
Характерной особенностью распределения эпигенетической метки транскрипционно неактивного хроматина H3K9me3 на стадии зиготы является ее преимущественное присутствие в женских пронуклеусах. При этом области локализации H3K9me3, в первую очередь, наблюдаются в составе кольцевого гетерохроматина, окружающего проядрышки. Данный характер мечения сохраняется и на поздней двухклеточной стадии. Напротив, на стадии морулы и бластоцисты многочисленные сферические области гетерохроматина, содержащие H3K9me3, наблюдаются в нуклеоплазме, тогда как перинуклеолярная локализация H3K9me3 выявляется крайне редко.
Эпигенетическая метка транскрипционно активного хроматина H4К5ас выявляется как в женских, так и в мужских пронуклеусах зиготы, при этом в мужских пронуклеусах более выражено мечение кольцевого перинуклеолярного гетерохроматина. На поздней двухклеточной стадии большая часть H4К5ас также выявляется в составе гетерохроматина, окружающего проядрышки. Сходный характер мечения наблюдали на стадии морулы, тогда как на стадии бластоцисты распределение метки носило более диффузный характер.
Солокализация H3K9me3 и белка ATRX выявляется в ядрах двухклеточных эмбрионов, как в составе перинуклеолярного гетрохроматина, так и в зонах гетерохроматина, не ассоциированных с проядрышками. Интересно отметить, что, несмотря на то, что H3K9me3 в настоящее время рассматривается как основной функциональный партнер ATRX, в ядрах ранних эмбрионов мыши присутствуют области, где эти белки локализованы независимо друг от друга. Не менее интересен тот факт, что ATRX в ядрах поздних двухклеточных эмбрионов мыши выявляется не только в отдельных зонах локализации эпигенетического маркера неактивного хроматина H3K9me3, но и маркера активного хроматина – H4К5ас. Солокализация H4К5ас и ATRX также является наиболее заметной на поздней двухклеточной стадии и выявляется в отдельных областях гетерохроматина, ассоциированного с проядрышками.
Таким образом, на ранних стадиях дробления эмбрионов мыши гетерохроматин, окружающий проядрышки и не включающий Br-УТФ (то есть являющийся транскрипционно неактивным), содержит не только маркеры транскрипционно неактивного хроматина – ATRX и H3K9me3, но и маркер активного хроматина – H4К5ас, что указывает на особое функциональное состояние перинуклеолярного хроматина в период активации эмбрионального генома.