Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАК
Статья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 10 августа 2018 г.
Аннотация:Ген Pou5f1 кодирует ключевой для плюрипотентных стволовых клеток транскрипционный фактор
Oct-4. Вместе с Sox2 они образуют гетеродимер и
регулируют транскрипцию собственных генов, а также Nanog, Fgf4, Utf1, Fbx15. Oct-4 является незаменимым при индуцировании плюрипотентности. Кроме того, нокдаун Pou5f1 ведет к дифференцировке
плюрипотентных клеток. Регуляция гена Pou5f1
происходит через промотор, проксимальный энхансер и дистальный энхансер. Во время транскрипции
Pou5f1, эти последовательности являются мишенями для связывания с регуляторными белками.
На ранних стадиях эмбриогенеза до имплантации, а
также в культивируемых эмбриональных стволовых
клетках мыши ключевую роль играет дистальный энхансер, который в свою очередь имеет две важные
последовательности – сайт 2А и сайт 2Б. С сайтом
2Б связывается уже описанный гетеродимер Oct-4-
Sox2. При этом, точно не установлены белки-кандидаты на связывание с сайтом 2А (ССССТСССССС).
В ходе наших in vitro исследований с помощью методов гель-ретардации, аффинной хроматографии
и масс-спектрометрии, было выявлено несколько
представителей семейства поли(Ц)-связывающих
белков – hnRNPK, Pcbp1, Pcbp2. В первую очередь,
они известны как РНК-связывающие белки, однако,
есть данные и о транскрипционной регуляции посредством их связывания с ДНК. Была подтверждена их роль в регуляции экспрессии BRCA1 и muопиоидного рецептора. Более того, было показано,
что во время нокдауна hnRNPK, падает экспрессия
таких плюрипотентных маркеров, как Oct-4, Nanog
и Rex1. В случае с Oct-4, это хорошо согласуется
с полученными нами результатами. Мы также проверили влияние нокаута hnRNPK и Pcbp1 на экспрессию Oct-4 с помощью системы CRISPR-Cas9 на эмбриональных стволовых клетках мыши. Оказалось,
что в отстутствие hnRNPK, через 4 дня снижается
уровень Oct-4. При более длительном культивировании такой нокаут приводит к гибели клеток, что не
связано с плюрипотентностью, т. к. такой же эффект
наблюдался нами и на фибробластах линии NIH 3T3.
При этом, нокаут Pcbp1 никак не отразился ни на
экспрессии Oct-4, ни на жизнеспособности клеток.
В настоящее время, мы работаем над подтверждением связи hnRNPK с дистальным энхансером in vivo
с помощью метода хроматин-иммуннопреципитации.
Финансирование исследования: Исследование
поддержано грантом РНФ 17-14-01407.