![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
1) Разработан новый подход к регуляции каталитических свойств ферментов, который основан на образовании ковалентных конъюгатов фермента с разветвленными сополимерами хитозана - хитоПЭГилирование. Эффективность метода хитоПЭГилирования продемонстрирована на примере нового рекомбинантного препарата L-аспарагиназы Erwinia carotovora (EwA). Данный препарат является иммунологически отличным от используемых в медицинской практике препаратов L-аспарагиназы из E. coli, что определяет перспективы его использования в качестве альтернативы при развитии гиперчувствительности к препарату из E. coli в результате длительного лечения или при индивидуальной непереносимости первичного препарата. Проведена оптимизация молекулярной архитектуры и состава конъюгатов EwA с ПЭГ-хитозанами. Найдено, что конъюгаты с ПЭГ-хитозаном (ММ 5 и 15 кДа) характеризуются более высокой каталитической активностью (в 2-5 раз в зависимости от состава полимера) по сравнению с нативным ферментом, а также повышенной стабильностью в условиях моделирующих физиологические. Показано, что решающим фактором, влияющим на активность конъюгатов EwA, является его степень пэгилирования хитозана. Установлено, что конъюгирование EwA с ПЭГ-хитозаном увеличивает еѐ цитостатическую активность (на 20-40%) в отношении клеток хронического миелоидного лейкоза человека К562, клеток лимфомы Беркитта Raji и клеток Т-клеточного острого лимфобластного лейкоза человека Jurkat по сравнению с нативным ферментом. Полученные данные открывают пути для синтеза L-аспарагиназных препаратов с улучшенными биокаталитическими свойствами. 2) В рамках развития разработанного в проекте подхода хитоПЭГилирования для создания ферментных препаратов медицинского назначения с улучшенными биокаталитическими характеристиками, исследована применимость хитопэгилирования для L-аспарагиназы Rhodospirillum rhubrum (RrA), фермента, который является перспективным для создания L-аспарагиназного препарата с пониженной токсичностью и высокой противоопухолевой активностью, как в отношении клеток опухолей лейкозного и лимфоидного происхождения, так и в отношении солидных опухолей. Установлено, что разработанный подход позволяет сместить рН оптимум фермента с 9,2 – 9,5 в область физиологических значений рН 7,5 – 8,5. При этом удельная активность RrA в физиологических условиях возрастает более чем в 2-3 раза в зависимости от состава конъюгата.