ИСТИНА

Выполненная в 2018 году работа представляет собой продолжение и дальнейшее развитие многолетнего исследования, которое было начато нашим временным творческим коллективом еще в 2012 году. Данное исследование призвано выявить механизмы эволюционных преобразований в культуре гриба Podospora anserina (Rabenh.) Niessl на длительном промежутке времени. Мы поддерживаем непрерывный рост 8 независимых мицелиальных линий P. anserina в качалочной (перемешиваемой) глубинной культуре, что обеспечивается путем последовательных серийных пассажей. Все 8 линий пересевают единовременно в свежую питательную среду стандартного состава, содержащую декстрин в качестве единственного источника углерода и мочевину для обеспечения азотного питания. Как и было заявлено, полные геномы всех 8 экспериментальных линий были отсеквенированы в 400-м пассаже (6 лет от старта эксперимента). Это позволило пополнить базу выявленных ранее de novo мутаций 105 новыми однонуклетотидными заменами. Среди них 9 были идентифицированы как синонимические, 25 – как несинонимические, 4 – как нонсенс-мутации (стоп-кодон), остальные 67 замен попали в некодирующие и непроаннотированные области. Стоит отметить, что наблюдаемая ранее тенденция сохранилась: имеет место обогащение несинонимическими мутациями, то есть мутациями, приводящими к замене аминокислоты в соответствующем белке. Небольшое количество дополнительных стоп-кодонов также было обнаружено. Названные две группы мутаций представляют интерес для проведения дальнейшего анализа, так как могут оказывать непосредственное влияние на функции белков, а значит, и на связанные с ними метаболические пути гриба. Вопреки ожиданиям, изоляты всех линий, взятые в 400-м пассаже, потребляют глюкозу, фруктозу, мальтозу, D-маннозу, пептон и казеин, а также растут на пивном сусле. Добавление в стандартную агаризованную среду 2,5%, 5% или 7,5% NaCl не блокирует рост большинства из них. В отсутствие углерода либо азота развивается лишь поисковый мицелий. На ультратонких срезах P. anserina обнаружены специфические двумембранные везикулы, формирующиеся путем глубокой инвагинации и отшнуровывания плазмалеммы. Их обилие в клетках мицелия увеличилось с увеличением продолжительности эволюционного эксперимента. Подобные структуры были лишь вскользь отмечены другими авторами. Изучение их роли в грибной клетке представляет большой интерес для цитологии грибов. Установлено, что двумембранные везикулы стабильно формируются в клетках P. anserina, что критически важно для их дальнейшего изучения. На основании результатов, накопленных нами в период с 2012 по 2018 год включительно, подготовлены материалы публикации – она была направлена в редакцию рецензируемого журнала. Кроме того, был представлен доклад на профильной международной конференции.