ИСТИНА

С целью создания оптических сенсорных устройств для определения комплекса маркеров окислительного (ОКС) и антиоксидантного (АОС) стрессов получены новые универсальные пленочные покрытия на поверхности оптических стекол и в ячейках полистирольного планшета на основе самоорганизующейся структуры полиэлектролитного комплекса {пероксидаза – хитозан}. Формы сенсорных устройств адаптированы для серийно выпускаемых современных флуориметров с держателем для твердых образцов, спектрофотометров и флуориметров с классическими кюветными отделениями и планшетными приставками. Изучены сорбционные свойства полученных пленок, механизмы сорбции аналитов на них, а также кинетические параметры предложенных индикаторных систем в водной, водно-органической (растворители – этанол, ДМСО, ацетонитрил) и мицеллярной средах (в присутствии ЦТАБ, ТВИН 80, ДДС) для определения маркеров АОС (флавоноидов) методами твердофазной спектрофотометрии и флуоресценции. В качестве аналитов – представителей маркеров АОС, на первом этапе работы детально изучены флавоноиды различного строения: кверцетин, дигидрокверцетин, рутин, эпикатехин и кофейная кислота. В результате спектроскопических и кинетических исследований установлено, что наиболее эффективным и специфичным биокатализатором окисления флавоноидов по сравнению с лакказой и тирозиназой является пероксидаза. Показано, что наибольшую чувствительность и селективность определения флавоноидов обеспечивает подход, основанный на их пероксидазной дериватизации в присутствии 1,2-дифенилэтилендиамина. Проведение индикаторной реакции в ячейках 96-луночного полистирольного планшета позволило повысить производительность анализа, уменьшить в 10 раз объемы реакционной смеси, а главное - обеспечило возможность мультиплексного определения указанных аналитов. Предложенный подход позволяет одновременно анализировать до 20 образцов проб, время анализа не превышает 30 мин. На примере двукомпонентных смесей флавоноидов показано, что введение в реакционную систему недериватизирующегося рутина даже при его многократном избытке не влияет на величину аналитического сигнала. При одновременном введении в реакционную систему двух флавоноидов, вступающих в реакцию дериватизации, и одного недериватизирующегося (рутина) аналитический сигнал аддитивен. Разработанные методики определения флавоноидов апробированы в анализе ряда лекарственных препаратов и растительного сырья. Несмотря на содержание в препаратах значительного количества сопутствующих активных и вспомогательных компонентов, дополнительная пробоподготовка, помимо растворения в органическом растворителе (ДМСО) не требовалось.