ИСТИНА

Целью данного исследования стало изучение влияния G4 в составе ДНК на активность Dnmt3a при различных конфигурациях взаимного расположения G4 и метилируемых CpG-сайтов. В качестве модельных субстратов были использованы G4-формирующие олигонуклеотиды и ДНК-дуплексы с инкорпорированными последовательностями, формирующими параллельные G4 (G4-ДНК). В исследуемых G4-ДНК количество метилируемых CpG-сайтов варьировалось, при этом они располагались различным образом относительно G4. Возможность связывания G4-олигонуклеотидов с Dnmt3a исследовалась методом поляризации флуоресценции. Степень метилирования CpG-сайтов в G4-ДНК определяли методом защиты от расщепления эндонуклеазой R.Hin6I. Доказано, что G4-олигонуклеотиды связываются с МТазой Dnmt3a-CD, что было дополнительно подтверждено ингибированием метилирующей активности фермента в их присутствии. Степень метилирования CpG-сайтов в ДНК МТазой Dnmt3a-CD значительно снижалась в присутствии инкорпорированного G4. Важную роль в процессе метилирования G4-ДНК играло количество CpG-сайтов, а также расстояние между ними и G4. Впервые показано, что G4 в составе ДНК способны значительно затруднять функционирование Dnmt3a-CD. Полученные данные позволили предложить механизм влияния взаимного расположения G4 и CpG-сайтов в составе ДНК на активность Dnmt3a.