ИСТИНА

Введение Генетически кодируемые биосенсоры позволяют регистрировать динамику изменения некоторых биохимических параметров клетки in vivo в режиме реального времени. Установка в черепе животного краниального окна – оптически прозрачного импланта – позволяет детектировать сигнал биосенсора с поверхностных слоев мозга различными методами микроскопии. С использованием биосенсоров, мультифотонной микроскопии и метода фототромбоза сосудов возможно изучать процессы, происходящие в ходе ишемического инсульта. Материалы и методы Мышам линии C57Bl/6 проводили операцию, в ходе которой формировали круглое отверстие в черепе и инъецировали в кору мозга (координаты инъекции: AP: ¬¬1; ML −1,5; DV −0,6) аденоассоциированные вирусы 9 серотипа (AAV9), содержащие ген сенсора пероксида водорода HyPer7 с митохондриальной локализацией под нейрональным промотором (hSyn1-H7-mito). Контрольной группе мышей инъекцию не проводили. Далее проводили установку покровного стекла и металлического адаптера для фиксации мыши в микроскопе. Спустя 3 недели после установки краниального окна, исследовали методом мультифотонной микроскопии, области коры мозга, экспрессирующей биосенсор. На контрольных животных проводили адаптацию методики моделирования ишемического инсульта методом фототромбоза с использованием красителя бенгальского розового. После чего применяли эту методику на животных, чьи нейроны экспрессировали сенсор. Ишемическое повреждение подтвердили с помощью окраски трифенил-2,3,5-тетразолия хлоридом (ТТХ). Результаты Использование описанных технологий позволило зарегистрировать флуоресценцию биосенсора hSyn1-H7-mito в отдельных нейронах на глубине до 550 нм. Использование мультифотонной микроскопии позволило визуализировать сенсор на субклеточном уровне. В режиме реального времени у обеих групп мышей был проведен и зарегистрирован фототромбоз поверхностных сосудов коры мозга, подтвержденный при окраске ТТХ. Выводы Мы разработали метод установки краниальных окон и провели регистрацию флуоресценции генетически кодируемого биосенсора HyPer7 в коре головного мозга мышей, а также адаптировали методику проведения фототромботического инсульта. При использовании различных биосенсоров, эта технология позволит наблюдать за течением инсульта.