ИСТИНА

Важной проблемой при лечении ВИЧ-инфекции является возникновение лекарственно устойчивых форм вируса, что делает актуальной разработку новых подходов к ингибированию ВИЧ-1, способных свести к минимуму появление резистентных штаммов. Решение этой проблемы невозможно без детального понимания механизмов всех стадий репликации вируса и выявления новых мишеней для антиретровирусной терапии. Наименее изученным этапом репликации ВИЧ-1 является репарация повреждений, возникающих в геноме клетки при интеграции в нее кДНК вируса. Без постинтеграционной репарации генома репликация вируса невозможна. Считается, что такая репарация осуществляется клеточными белками, однако точно неизвестно, какие именно клеточные белки вовлечены в этот процесс. Ранее нами было показано, что ключевую роль в этом процессе играют киназы DNA-PK и ATM - известные участники систем репарации двуцепочечных разрывов ДНК. Их активация строго зависит от способности интегразы ВИЧ-1 взаимодействовать с одной из субъединиц DNA-PK комплекса – белком Ku70. Для выяснения других клеточных белков, вовлеченных в постинтеграционную репарацию, мы проанализировали изменение клеточного фосфопротеома в ответ на трансдукцию клеток псевдовирусом на основе генома ВИЧ-1. В результате было установлено, что через 14 и 18 часов после трансдукции повышается уровень фосфорилирования около 300 белков, в том числе 28 - из систем репарации ДНК. С использованием CRISPR-Cas9 библиотеки к генам из систем клеточного ответа на повреждения ДНК нам удалось идентифицировать 11 потенциальных участников постинтеграционной репарации, включая ранее изученные нами факторы Ku70 и Ku80. Для двух новых кандидатов: Fen1 и Plk1, – подтверждена роль в постинтеграционной репарации ВИЧ-1 с использованием клеток с пониженной экспрессией указанных генов. Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РНФ 22-14-00073.